|
Для определения чувствительности микробов к антибиотикам
применяют различные методы: серийные разведения и диффузии антибиотикоз
в агаре.
Метод серийных разведений.
Берут 8 пробирок с 2 мл бульона, в первую пробирку
вносят 2 мл основного раствора, приготовленного из расчета 1 мг антибиотика
на 1 мл растворителя. Из первой пробирки 2 мл переносят во вторую пробирку
и т. д. до 7-й пробирки включительно, а 8-я пробирка служит контролем
роста микробов. Суточную культуру на косом агаре смывают физиологическим
раствором и разводят по оптическому стандарту до 20 000 микробных тел
в 1 мл, бульонную культуру разводят в стерильном мясопептонном бульоне
в 10 000 раз. По 0,2 мл полученной взвеси вносят в каждую пробирку.
Пробирки встряхивают и выдерживают в термостате. Через
18-20 часов учитывают результаты. Последнюю пробирку (наименьшая концентрация
антибиотиков), в которой размножения микробов не происходит, используют
как минимальную действующую дозу антибиотика для данного микроба.
Метод диффузии в агаре (способ
дисков). Предварительно питательную среду в чашке Петри
подсушивают в термостате. Затем определяют чувствительность испытуемой
культуры, например, стафилококков. Суточную бульонную культуру (2 млрд.
в 1 мл) вносят стерильной пипеткой на чашки с мясо-пептонным агаром и
покачиванием чашки равномерно распределяют культуру по поверхности агаровой
пластинки. После этого накладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками,
на одинаковом расстоянии друг от друга и от центра. Рекомендуется
слегка надавить на диски, чтобы они плотно прилегали
к среде. Чашки оставляют при комнатной температуре
на 1 час, затем их помещают в термостат при 37°С
на 18-20 часов.
Чувствительность бактерий к
антибиотикам определяется по величине зоны угнетения
роста. Измерение диаметра зоны проводится линейкой
или циркулем, приложенными ко дну чашки. Зона задержки
роста диаметром 10-15 мм указывает на слабую чувствительность
бактерий к антибиотику, 15-25 мм - на среднюю чувствительность
и более 25 мм - на высокую чувствительность. Если в
зоне задержки роста появляются единичные колонии бактерий,
то это указывает на наличие устойчивых особей к антибиотику.
В этом случае производится повторное испытание чувствительности
выросших колоний.
Для лечебной цели применяют антибиотики,
которые дают наибольшую зону подавления роста бактерий.
Метод серийных разведений является более точным, а
метод бумажных дисков дает только ориентировочное представление.
|
